實驗室廢宅腐女

很多實驗都需要使用細胞做為動物實驗、臨床實驗前的測試。

那培養細胞要怎麼培養呢？我這就來介紹~

前準備：medium、PBS、trypsin這三罐從冰箱拿到37度水浴槽回溫，從培養箱(incubator)中拿出細胞在顯微鏡底下觀察，紀錄滿度。

環境整理

    先把開著紫外燈的操作台的紫外燈關掉、開白光、開風扇，擦手紙噴酒精後擦過一遍操作台的桌面，將回溫好的medium, PBS, trypsin從水浴槽拿出來，噴酒精消毒外層後放入hood內。點燃酒精燈，將所有瓶瓶罐罐過火消毒，首先先過火瓶蓋，接著旋開一點再過一次火、最後全部打開過火瓶口和蓋子，過完火後將瓶蓋蓋回去。

PBS wash

    接下來將suction打開，把dish裡面的medium吸乾淨，再加入5mL PBS清洗，這步是為了將細胞的代謝物和medium洗掉，要洗兩次。

Trypsin打細胞

    PBS清洗細胞後將PBS吸乾淨，再加入trypsin 37度C反應3~5分鐘，trypsin可以把貼壁生長的細胞打下來，但是放太久會殺死細胞。

Medium終止反應

    trypsin反應3~5分鐘後，可以放到顯微鏡底下觀察細胞有沒有被打下來。貼壁生長的細胞還沒被打下來之前是紡錘狀的，被打下來後是圓球狀的。確認有被打下來後，加入5ml medium終止trypsin反應。

離心回溶

    將總共6ml(1ml trypsin + 5ml medium)的溶液拿去離心，吸掉上清液，留下底部的白色細胞pellet，用1 ml 的medium回溶得到一毫升細胞液。

Counting

    取10ul的細胞液加入離心管中，並使用trypan blue做活細胞染色並稀釋，取10ul加入到counting chamber中，上顯微鏡數細胞。得到的細胞平均數量x稀釋倍率x10的四次方=細胞液的濃度(每毫升幾顆)

回種

    根據Counting得到的數據，計算自己要下多少體積的細胞液到盤子裡面。

結束

    跟開始時的準備一樣的收東西法，離開前記得消毒、關風扇、開紫外燈、瓶瓶罐罐都要再過一次火。

養細胞最重要的是，不要讓細菌汙染細胞，所以每一個消毒和過火的步驟都很重要。